糖尿病及并发症研究背景
近年来，糖尿病呈迅猛增长态势，全球糖尿病患者已超过5.3亿人（国际糖尿病联盟IDFDiabetesAtlas，v10）。中国是糖尿病患病率增长最快的国家之一，在过去40年增长了近20倍，年患病人数达1.29亿人，居世界第一。其中2型糖尿病（Type2DiabetesMellitus,T2DM）是最为常见的糖尿病类型，约占全球所有糖尿病病例的90%至95%。
2型糖尿病是一种严重的慢性长期疾病，患病原因是身体对正常或者高水平的胰岛素产生抵抗，和/或胰腺分泌的胰岛素量不足。如果不加以治疗，长期血糖升高可导致严重的并发症，包括心肌梗塞、中风、肾功能衰竭、失明和糖尿病足等。有数据显示，糖尿病并发症的发生率高达73.2%，并发高血压的几率有31.9%，脑血管病的几率有12.2%，心血管病变的几率有15.9%，下肢血管病变的几率有5.0%，眼部疾患的几率有34.3%，肾脏病的几率有33.6%，神经病变的几率有60.3%。
尽管目前已有多种口服降糖药、胰岛素以及其他注射用药（例如GLP-1类似物，SGLT2抑制剂和胰岛素类似物）可为患者所用，但目前仍存在许多未被满足的临床需求，尤其是针对糖尿病并发症的药物需求。因此该领域吸引了大量的生物制药公司投资开发新药或研究老药新用。
小编语：Olink蛋白组基于专利的PEA技术，可实现在1-6微升临床样本量中同时检测高达3千种低至fg/ml的蛋白标志物，其中包括近千种炎症相关蛋白。Olink蛋白组学技术极大地提高了药物机制和转化医学研究效率，已越来越多地被应用在多种疾病，包括糖尿病相关临床试验研究中。本期小编就来分享下Olink蛋白组技术在糖尿病及其并发症药物临床试验中的典型应用案例。
案例1??｜勃林格殷格翰探索降糖药恩格列净降低心力衰竭发生率作用机制及药效标志物
项目状态：进行中
主要参与单位：勃林格殷格翰
全球已有多个SGLT2（钠-葡萄糖协同转运蛋白2）抑制剂获批用于成人2型糖尿病（T2DM）的治疗，在中国上市的有卡格列净、恩格列净、达格列净等。目前已经公布的多项SGLT2抑制剂心血管结局研究结果显示，SGLT2抑制剂不仅具有降糖疗效，还能够降低体重、降低血压、降低心血管风险和肾脏风险，提供全面获益，被誉为新一代“神药”。如EMPEROR研究结果显示，恩格列净可降低38%的心血管死亡风险和35%的心衰住院风险。因此，恩格列净作为一种可降低成人心血管死亡和心力衰竭住院风险潜在的新疗法正在美国FDA进行优先审查。
虽然SGLT-2抑制剂对心血管和肾脏有益的作用已在多项临床试验中得到证实，但这些作用的确切分子机制尚不清楚。SGLT2抑制剂对于心肾的保护作用远远超出其对血糖的影响。考虑到其他具有更强降糖作用的药物并未表现出类似获益，因此用降糖解释SGLT2抑制剂的心肾获益并不准确。为了更精准了解恩格列净对心力衰竭（HF）患者的受益机制，勃林格殷格翰近期宣布其与Olink公司合作，采用后者的Explore高通量蛋白标志物分析平台，分析来自EMPEROR-Reduced和EMPEROR-Preserved临床试验的各1,个血液样本中的近3千种蛋白生物标志物，以全面深入地揭示恩格列净对心力衰竭患者的潜在作用模式和鉴定最佳的疗效预测标志物（临床试验号NCT）。目前该项目样本收集、蛋白组学分析和数据交付已于年第三季度完成，正在进行最后数据分析阶段。
案例2??｜拜耳制药探索降糖药finerenone改善慢性肾脏病作用机制及药效标志物
项目状态：进行中
主要参与单位：拜耳制药公司
慢性肾脏病（ChronicKidneyDisease,CKD）是糖尿病最常见的并发症之一，也是心血管疾病的一个独立危险因素。在所有2型糖尿病患者中，大约40%的患者会发展为CKD。CKD是终末期肾病和肾功能衰竭的主要原因，在晚期，患者可能需要透析或肾移植以维持生存。在10年时间里，伴有CKD的T2DM患者死于心血管相关疾病的可能性是单纯2型糖尿病患者的3倍。拜耳启动的finerenoneIII期临床项目是迄今为止最大的CKDIII期临床项目。其中的FIDELIO-DKDIII期研究证实了finerenone对CKD合并T2D的患者具有积极的肾脏和心血管益处，是第一个被证实在患有T2DM和CKD的患者中能延缓慢性肾脏病进展的非甾体类选择性盐皮质激素受体拮抗剂。另一个FIGARO-DKDIII期研究全球入组了例伴有CKD的T2D患者，主要调查finerenone与安慰剂分别联合标准护理在降低心血管不良事件发病率和死亡方面的疗效和安全性。在FIGARO-DKD临床试验基础上，拜耳近期启动了一项名为FIGARO-BM的附加研究，利用OlinkExplore高通量蛋白标志物分析平台检测份FIDELIO-DKD试验中采集的血液样本中近3千种蛋白生物标志物，以更全面深入地研究finerenone对合并T2D和CKD的患者的分子作用模式和鉴定最佳的疗效预测标志物（临床试验号NCT）。目前该项目样本收集已完成，正在进行蛋白组学分析和数据分析阶段。
案例3??｜武田制药发现T2DM急性冠脉综合征患者肾功能恶化的活检生物标志物
期刊：AmericanJournalofNephrology
发表时间：年1月
主要参与单位：法国洛林大学、Takeda武田制药公司
肾功能恶化(WorseningRenalFunction,WKF)在2型糖尿病患者中很常见，并且与预后不良有关。WKF的风险在心血管风险极高的T2DM患者中尤其升高，例如近期患有急性冠状动脉综合症(AcuteCoronarySyndrome,ACS)或心肌梗塞(MyocardialInfarction,MI)的患者。
武田制药于年发起了一项名为EXAMINE的全球性大型随机双盲安慰剂对照临床试验，研究其研发的阿格列汀对比标准疗法治疗2型糖尿病和急性冠脉综合症患者的心血管安全性，全球总共入组了位近期出现ACS的T2D患者（临床试验号NCT）。
反映肾脏损害的血液和尿液生物标志物已被证明可预测患有和未患有T2D患者的WKF和心血管事件。然而，不同研究之间确定的生物标志物差异很大，这给选择用于临床实施的生物标志物带来了困难。使用包含尿液和血液生物标志物的大型生物标志物组合可能有助于筛选在预测WKF方面具有最佳性能的生物标志物。因此，该研究团队采用Olink技术（CVDIIPanel)检测了EXAMINE临床试验中名患者血液和尿液样本中近百种蛋白生物标志物数据，旨在筛选能预测WKF的生物标志物。
该研究结果显示，在近0名患有T2D和近期发生ACS的患者中，多种蛋白生物标志物具有预测WKF的潜力，其中血液KIM-1蛋白是与WKF关联最强的生物标志物，AUC可达0.73。因此，该研究团队认为血液KIM-1可用于预测临床环境中的肾功能下降，从而为肾功能不全进展风险较高的T2D患者制定个性化的预防策略。
Olink技术特点
?微量样本高通量
1ul血浆中可以同时检测48—种蛋白标志物，3.2ul血浆中可以检测1多种蛋白标志物，并即将拓展至+biomarkers。
?超灵敏
目标蛋白检测灵敏度（低至fg/ml水平），可以在组学水平上检测疾病相关的成百上千种低丰度蛋白（尤其是血浆、血清、脑脊液等各种体液样本中的低丰度biomarker）。
?宽动态范围
整个Pannel横跨10个log值，可以同时兼顾不同丰度的蛋白marker。
?高特异
基于PEA专利、质控设计和充分验证，每一个目标蛋白都是明确的靶向biomarker，克服了既往蛋白组学方法的特异性挑战。
御领生物Olink检测服务流程
御领生物Olink检测服务样本准备要求
?血清样本准备
1.收集全血到血清采集试管中；
2.让血液在室温下凝固，通常需要15-30分钟。注意放置不宜超过60分钟，凝结的细胞有可能开始溶解；
3.在制冷离心机（2-8°C）中以-xg离心10分钟，以去除血块；
4.立即将血清转移到干净的管中，分装至材质有保障的EP管（≥ul/管）；
5.储存在-80℃。
?血浆样本准备
1.收集全血到市售的抗凝剂处理采集管内(经EDTA，柠檬酸或肝素处理)，注意所有样本应使用同一种采集管；
2.在制冷离心机（2-8°C）中以-xg离心10分钟，以去除血浆中的细胞；
3.立即将血浆转移到干净的管中，并分装至材质有保障的Ep管中（≥ul/管）；
4.储存在-80℃。
?其它非标准样本准备
例如细胞培养上清、外泌体、唾液、痰液、人母乳、皮肤胶带、尿液、脑组织、干血斑、肺泡灌洗液、鼻内容物等，具体的样本准备要求请market
royal-biotech.
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